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質問
QNo.4198506 ＤＮＡ組み換えタンパクの発現
質問者：contribute ヒトのタンパク質を大腸菌に発現させようとしたところ、完全長のタンパク質はほとんど発現されず、わずかに発現した完全長のタンパク質もほとんど可溶化されませんでした。

これは導入したＤＮＡにイントロンが含まれていたので、ＲＮＡスプライシングの機能を持っていない大腸菌では発現ができなかったというのが理由として考えられるのですが、
これ以外に発現しなかった理由として考えれるものがあったら教えてください。
困り度：
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質問投稿日時：
08/07/23 17:13
この質問に対する回答は締め切られました。
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回答良回答20pt
ANo.2 大腸菌での発現ではイントロンのないcDNAを使います。イントロンはあってはなりません。

可溶化のテクニックはいろいろありますが、インクールジョンボディとか、可溶化、大腸菌　発現などで検索すると出てきます。原因は厳密には分からないが（蛋白の折りたたみの仕組みが細かくは分かっていないため）、異種蛋白発現ではよく起こり、普通の現象ということだと思います。
回答者：ga111
種類：回答
どんな人：一般人
自信：参考意見
回答日時：
08/07/23 21:12
この回答へのお礼この回答にお礼をつける(質問者のみ)

回答
ANo.1 組み替えタンパク質を大腸菌に作られせる場合のトラブルは
ある意味いくらでもあります。

市販のプロトコールを見れば細かくトラブルシューティング等も書いてあるので、まずは参考にされてはいかがでしょうか。

​http://www.yodosha.co.jp/book/9784897063690.html​

​http://www.yodosha.co.jp/book/9784897069180.html​
回答者：otx
種類：アドバイス
どんな人：専門家
自信：参考意見
回答日時：
08/07/23 19:19
この回答へのお礼この回答にお礼をつける(質問者のみ)
 
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